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首页 > 产品导购

:免疫血清简单介绍
发布时间:2018/11/14 11:18:17 阅读次数:162

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 免疫血清也称抗血清,就是含有抗体的血清制剂。种类很多,广泛的应用于医学、生物学的各个学科,特别在免疫测定和免疫病理的诊断中更是常用。

免疫血清的实验原理:

具有免疫原性的抗原可刺激机体相应B细胞增殖、分化形成浆细胞并分泌特异性抗体。由于抗原分子表面的不同决定簇为不同特异性的B细胞克隆所识别,因此由某一抗原刺激机体后产生的抗体,实际上为针对该抗原分子表面不同决定簇的抗体混合物(即多克隆抗体)。另外,抗体的产生具有回忆应答的规律性,现为初次免疫注射与再次免疫注射后的抗体应答特点截然不同。这是由于记忆性B细胞参与再次应答所致。

免疫方法 

不同的免疫血清根据抗原的性质不同而不同。

下面以制备家兔抗人IgG免疫血清为例作具体说明。
1.
用剪刀剪去家兔两后脚掌的部分兔毛,以酒精及碘酒消毒皮肤。
2.
第一次免疫

2 ml注射器吸取弗氏完全佐剂(FCA)乳化的抗原(人IgG)下称FCA IgG1 ml,每侧脚掌皮下各注入0.5 ml

3. 第二次免疫
间隔10-14 天后,于两侧窝及鼠蹊部肿大的淋巴结内注入FCA-IgG,每个淋巴结注0.1 ml,其余注入淋巴结附近皮下共1 ml。如淋巴结未肿大或肿大不明显时,直接注入两侧窝及鼠蹊部皮下。

4. 间隔7-10 天后,从耳静脉采血0.51.0 ml,分离血清,以双相琼脂扩散试验测定免疫血清的抗体效价(即试血)。效价至少应达到116以上时才能放血。

5. 若效价未达到要求,可用不加佐剂的抗原液(人IgG)耳静脉内注射免疫。即于1 周内注射3 次,分别为0.10.30.5 ml。间隔1 周再试血。如效价达到要求应立即放血。另外,也可在第2 次免疫后,以弗氏不完全佐剂(FIA)乳化的抗原(人IgG)(简称FIA-IgG)再免疫1-2 次。注射部位、剂量和间隔均同第2 次,再试血测抗体效价,如效价达到要求立即放血。

6. 放血分为心脏采用血法和颈动脉放血法,两种选其一即可。

7. 分离血清:将三角烧瓶的血置37 ℃温箱1 小时,再置4 ℃冰箱内34 小时。待血液凝固血块收缩后,用毛细滴管吸取血清。于3000 rpm离心15 分钟,取上清加入防腐剂(0.01 %硫柳汞或0.02 %叠氮钠,最终浓度),分装后置4 ℃冰箱中保存备用。

实验的注意事项:

1.       免疫用实验动物不能使用妊娠动物。同时实验动物的抗体反应性个体差异性较大,因此免疫时至少应选用两只以上动物。

2.       免疫用的抗原必须经FCAFIA充分乳化后才能注射,否则将明显影响抗原的免疫效果。

小鼠免疫需要的抗原量小,每次放血量不可以超过0.5ml。免疫血清属于多克隆抗体,一般如果是用于FACS分析,多数ELISA或细胞毒实验时,不需要纯化。但是,对于需要知道精确抗体浓度时,来进行化学修饰标记荧光素或放射物时或制备抗体片断时,要纯化。

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