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分分时时彩:实验操作中,IHC之石蜡包埋操作注意点及要点
发布时间:2018/10/22 17:09:11 阅读次数:245

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 常规的石蜡包埋过程包括五个基本步骤:即固定,脱水,透明,浸蜡和包埋,下面我们分步来介绍.

1 固定:取新鲜组织浸泡在4%多聚甲醛或10%福尔马林溶液中固定24-48h.固定完后用自来水冲洗五次,各30min.

以下几点建议请注意:

    组织离体后应在30min之内固定.

 固定液容积应为组织的5~10倍,固定时间应依据组织大小而定,固定时间过长,修复后抗原暴露不完全;时间过短则会固定不充分.

 脱水机内固定液一定要及时更换.

 固定过后应该水洗,否则容易造成脱片和染色不新鲜,同时也不利于蜡块内抗原 基因的保存.

2 脱水:组织经过50% 70% 85% 95%的梯度酒精各30min,无水乙醇两次,每次30min完成脱水.

以下几点建议请注意:

    没经充分固定的组织不得进去脱水.固定 脱水温度注意不得超过37℃.

     用于脱水的试剂容积应为组织总体积的5~10倍以上.

    由低向高浓度酒精脱水,级差越小越好,

     量大或条件允许,可将大小组织分开脱水,较大组织块脱水时间比较小者.

     组织置于无水乙醇内的时间不宜过长,以免硬化.

3 透明:分别经过无水乙醇:二甲苯 二甲苯(Ⅰ)(根据组织透明度,可减少或增加第二遍二甲苯透明的时间) 二甲苯(Ⅱ)各30min.

以下几点建议请注意:

    二甲苯的容积应为组织总体积的5-10倍以上.

    透明度时间适宜,依不同种类组织及其大小而异(子宫肌瘤 食管等坚硬组织延长;肝脏,小组织缩短)组织呈现棕黄或暗红色透明即可.

    二甲苯应及时过滤 更换.

4 浸蜡:蜡Ⅰ,蜡Ⅱ各30分钟.

注意点:石蜡温度控制在58-62℃,高于熔点2℃为佳.

5 包埋:将金属托放入熔化的石蜡,再放入组织,冷固待石蜡凝固.

以下几点建议请注意:

 防止各种异物组织包入蜡块内.

 包埋应先放石蜡后放组织,速度尽可能快,以免凝固.

 包埋用熔蜡应纯净,熔点与浸蜡的相近.

 包埋时不得使用明火,以防点燃,镊子不可温度过高,以免烫伤组织.

 包一个换一把镊子,防止污染.

 囊壁 管腔竖直包埋,所需切面向下包埋;扭曲组织正后包埋;多个小组织可以包在一个面.

IHCImmunohistochemistry, 免疫组织化学)是用标记的特异性抗体(或抗原)对组织内抗原(或抗体)的分布进行组织和细胞原位检测的技术.IHC实验中保护组织的两种主要方法是对组织进行石蜡包埋和冰冻,其中石蜡包埋是制作组织标本最常用 最基本的方法.

石蜡包埋对于组织形态保存完好,且能作连续切片,有利于各种染色对照观察;还能长期存档,供回顾性研究.实验组织保护的质量是保证病理报告准确性的重要环节.

 

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